《合成生物学》推荐 | 浙工大郑裕国等以分泌/转录比挖掘出毕赤酵母新型信号肽

毕赤酵母

  为发掘可用分泌信号肽,研究者对毕赤酵母的分泌蛋白组进行了探究,某一蛋白质在分泌蛋白质组中的丰度不仅取决蛋白质的分泌量,还取决于其蛋白降解速率、转录水平、mRNA翻译速率等。蛋白降解速率和mRNA翻译速率难以确定但每个蛋白的转录水平可通过转录组测序得到,因此研究者用分泌蛋白组中的蛋白丰度与其转录水平的比值对每一个分泌蛋白的分泌强度进行计算,最终发掘出比值最高的EPX1、PAS_chr3_0030、SCW10和 UTH1四种蛋白,其中EPX1的分泌信号肽为先前已报道可在毕赤酵母中用于分泌蛋白表达。接下来,研究者通过SignalP软件预测三种未报道蛋白的信号肽并偶联mCherry进行测试,荧光检测发现偶联PAS_chr3_0030信号肽的mCherry分泌效果最佳,与MFα信号肽相比分泌量提高了87%。进一步,研究者用人血清白蛋白进行测试,PAS_chr3_0030信号肽偶联的人血清白蛋白分泌量约为MFα 1.5倍;而MFα信号肽偶联腈水解酶NIT10无分泌,PAS_chr3_0030信号肽偶联腈水解酶NIT10仅有少量分泌,可通过与分子伴侣二硫键共表达可进一步提高表达量;最后研究者还测试了不同信号肽介导腈水解酶NIT09122、葡萄糖脱氢酶、核糖基烟酰胺激酶的分泌效果,这些均不能被MFα和其他三种信号肽分泌,而PAS_chr3_0030信号肽可正常分泌这些蛋白。

  综上,研究者通过对毕赤酵母分泌蛋白组和转录组的分析,挖掘出四种候选信号肽,通过一系列酶的测试PAS_chr3_0030信号肽的分泌能力最佳,有潜力促进毕赤酵母在表达分泌蛋白上的更多应用。 

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